Эдуард Витальевич Некрасов, канд. биол. наук, старший научный сотрудник
675000, г. Благовещенск, Игнатьевское шоссе, 2-й км
Eduard V. Nekrasov, PhD (Biol.), Senior Staff Scientist
2nd km Ignatyevskoe Rd., Blagoveshchensk, 675000
Денис Евгеньевич Наумов, канд. мед. наук, зав. лабораторией, лаборатория молекулярных и трансляционных исследований
675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, 22
Denis E. Naumov, PhD (Med.), Head of Laboratory of Molecular and Translational Research
22 Kalinina Str., Blagoveshchensk, 675000
Введение. Мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) человека составляют пул иммунных клеток и могут служить моделью для исследования иммунных заболеваний.
Цель. Тестирование биологической активности препаратов глицеролипидов из папоротников и хвощей, содержащих в своем составе длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты (ДЦПНЖК), в отношении МКПК без дополнительной стимуляции и после стимуляции форбол-12-миристат-13-ацетатом (ФМА) и иономицином.
Материалы и методы. Препараты глицеролипидов получали фракционированием общих липидов молодых вай папоротника Matteuccia struthiopteris и побегов хвоща Equisetum arvense на силикагеле. Для сравнения использовали фосфатидилхолин из яичного желтка. Состав жирных кислот препаратов анализировали методом газовой хроматографии. Мононуклеарные клетки выделяли из крови больных бронхиальной астмой. Параметры жизнеспособности и активации клеток оценивали методом проточной цитометрии.
Результаты. Препараты глицеролипидов из папоротника и хвоща, в отличие от яичного фосфатидилхолина, проявляли цитотоксическое действие. Наибольший эффект имела фракция липидов из папоротника, элюированная метанолом, которая снижала жизнеспособность клеток на 64,6 (51,1-79,0)% в концентрации 2 мкг/мл и вызывала полную гибель клеток при 20 мкг/мл. При стимуляции клеток ФМА/иономицином цитотоксический эффект препарата усиливался, однако доля МКПК, экспрессирующих маркер CD69, не изменялась. Цитотоксическое действие других препаратов липидов наблюдали при более высоких концентрациях (20 и/или 80 мкг/мл), а эффект был слабее: жизнеспособность снижалась на 7,1 (6,7-9,4)% для липидов папоротника, элюированных смесью хлороформ - метанол - вода (3:5:2), на 39,8 (26,4-41,6)% и 12,0 (10,0-15,5)% для фракций липидов хвоща, элюированных метанолом и смесью хлороформ-метанол-вода, соответственно, при концентрации препаратов 80 мкг/мл.
Заключение. Сравнение состава жирных кислот препаратов не подтвердило вклада ДЦПНЖК в наблюдаемые эффекты. Идентификация активного компонента позволит вести разработку лекарственного препарата при гипериммунном ответе или в модельных экспериментах.
Introduction. Human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) are a pool of immune cells and they are also a convenient model system for studying immune pathologies.
Aim. Testing for bioactivity of glycerolipid preparations from fern and horsetail species containing long chain polyunsaturated fatty acids (LCPUFAs) towards PBMCs without exogenous stimulation and after phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA) plus ionomycin stimulation.
Materials and methods. Glycerolipid preparations were produced by fractionation of total lipids, isolated from young fronds of the fern Matteuccia struthiopteris and shoots of the horsetail Equisetum arvense, on silica. Egg phosphatidylcholine was used for comparison. Fatty acids were analyzed by gas chromatography. Mononuclear cells were isolated from blood of patients with asthma. Parameters of cell viability and activation were estimated by flow cytometry.
Results. The glycerolipid preparations from the fern and horsetail were found to have a cytotoxic effect while egg phosphatidylcholine was not. The most active was the fraction of fern lipids eluted with methanol which reduced cell viability by 64.6 (51.1-79.0)% in the concentration 2 pg/ml and caused complete cell death in 20 pg/ml. After cell stimulation with PMA/ionomycin, the cytotoxic effect of the preparation increased although the level of PBMCs expressing the marker CD69 did not change. The cytotoxic effect of other glycerolipid preparations was observed in the higher concentrations (20 and/or 80 pg/ml) and it was less pronounced: the cell viability reduced by 7.1 (6.7-9.4)% for the fraction of fern lipids eluted by the mixture chloroform - methanol - water (3:5:2), by 39.8 (26.4-41.6)% and 12.0 (10.0-15.5)% for the fractions of the horsetail lipids eluted with methanol and the chloroform-methanol-water mixture, respectively, in the concentration 80 pg/ml.
Conclusion. Comparison of fatty acid composition of the glycerolipid preparations did not confirm a contribution of LCPUFAs to the observed effects. Identification of an active component may allow development of a drug for the local application in a hyperimmune response or for model experiments.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.