cfpdБюллетень физиологии и патологии дыханияBulletin Physiology and Pathology of Respiration1998-5029Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания10.36604/1998-5029-2026-100-77-87cfpd-1345Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯORIGINAL RESEARCHЭффект будесонида, формотерола и тиотропия на экспрессию катионных каналов TRPV1 и TRPV4 в мононуклеарах периферической крови in vitroEffect of budesonide, formoterol and tiotropium on the expression of TRPV1 and TRPV4 cation channels in peripheral blood mononuclear cells in vitroНаумовД. Е.NaumovD. E.

Денис Евгеньевич Наумов, канд. мед. наук, зав. лабораторией молекулярных и трансляционных исследований

675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, 22 

Denis E. Naumov, PhD (Med.), Head of Laboratory, Laboratory of Molecular and Translational Research

22 Kalinina Str., Blagoveshchensk, 675000 

denn1985@bk.ruНекрасоваО. О.NekrasovaO. O.

Олеся Олеговна Некрасова, канд. мед. наук, старший научный сотрудник, лаборатория механизмов вирус-ассоциированных патологий развития

675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, 22 

Olesya O. Nekrasova, PhD (Med.), Senior Staff Scientist, Laboratory of Mechanisms of Virus-Associated Developmental Pathology

22 Kalinina Str., Blagoveshchensk, 675000 

foxy_voxy_on@mail.ruСугайлоИ. Ю.SugayloI. Yu.

Ивана Юрьевна Сугайло, канд. мед. наук, научный сотрудник, лаборатория молекулярных и трансляционных исследований

675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, 22 

Ivana Yu. Sugaylo, PhD (Med.), Staff Scientist, Laboratory of Molecular and Translational Research

22 Kalinina Str., Blagoveshchensk, 675000 

ivanka_888@mail.ruГассанД. А.GassanD. A.

Дина Анатольевна Гассан, канд. мед. наук, зав. лабораторией механизмов вирус-ассоциированных патологий развития

675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, 22 

Dina A. Gassan, PhD (Med.), Head of Laboratory, Laboratory of Mechanisms of Virus-Associated Developmental Pathology

22 Kalinina Str., Blagoveshchensk, 675000 

dani-shi@mail.ruШелудькоЕ. Г.SheludkoE. G.

Елизавета Григорьевна Шелудько, канд. мед. наук, научный сотрудник, лаборатория молекулярных и трансляционных исследований

675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, 22 

Elizaveta G. Sheludko, PhD (Med.), Staff Scientist, Laboratory of Molecular and Translational Research

22 Kalinina Str., Blagoveshchensk, 675000 

liza.sheludko@mail.ruСинюкА. А.SinyukA. A.

Анастасия Андреевна Синюк, канд. мед. наук, научный сотрудник, лаборатория молекулярных и трансляционных исследований

675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, 22 

Anastasia A. Sinyuk, PhD (Med.), Staff Scientist, Laboratory of Molecular and Translational Research

22 Kalinina Str., Blagoveshchensk, 675000 

amur.asya@gmail.comФедеральное государственное бюджетное научное учреждение «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания»Far Eastern Scientific Center of Physiology and Pathology of Respiration20261606202601007787Copyright © Наумов Д.Е., Некрасова О.О., Сугайло И.Ю., Гассан Д.А., Шелудько Е.Г., Синюк А.А., 20262026Наумов Д.Е., Некрасова О.О., Сугайло И.Ю., Гассан Д.А., Шелудько Е.Г., Синюк А.А.Naumov D.E., Nekrasova O.O., Sugaylo I.Y., Gassan D.A., Sheludko E.G., Sinyuk A.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://cfpd.elpub.ru/jour/article/view/1345Введение

Введение. Экспериментально доказано, что катионные каналы TRPV1 и TRPV4 вовлечены в развитие различных патологических процессов, характерных для бронхиальной астмы (БА) и хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) и, таким образом, могут рассматриваться как потенциальные мишени для терапии данных заболеваний.

Цель

Цель. Проанализировать влияние фармакологически активных соединений (ФАС) базисной терапии БА и ХОБЛ – будесонида, формотерола и тиотропия – на экспрессию белков TRPV1 и TRPV4 в мононуклеарах периферической крови in vitro.

Материалы и методы

Материалы и методы. Мононуклеарные клетки для эксперимента были выделены из крови 9 практически здоровых добровольцев. Клетки инкубировали в контрольных условиях, либо в среде с будесонидом, формотерола фумаратом или тиотропия бромидом в серии концентраций: 1, 10 или 100 нМ, в течение 24 часов, а затем отмывали и анализировали общую экспрессию TRPV1 и TRPV4 методом непрямой проточной цитометрии. Значения экспрессии выражали в виде нормализованной медианной интенсивности флуоресценции (nMFI).

Результаты

Результаты. Будесонид, формотерол и тиотропий статистически значимо снижали экспрессию TRPV1 в лимфоцитах и моноцитах во всех проанализированных концентрациях. К примеру, исходная экспрессия в лимфоцитах (5,3 (4,9; 5,6)) при действии 10 нМ будесонида снижалась до 3,0 (2,6; 3,9) (p = 0,008), формотерола – до 2,8 (2,7; 3,6) (p = 0,01), тиотропия – до 2,8 (2,4; 3,0) (p = 0,008). Соответствующие показатели для моноцитов составляли 4,9 (4,6; 6,8) (p = 0,02), 4,4 (4,1; 6,4) (p = 0,02) и 4,3 (3,6; 4,7) (p = 0,01), при исходной экспрессии 10,2 (8,0; 10,3). В то же время, ингибирующий эффект ФАС на экспрессию TRPV4 отмечался преимущественно в лимфоцитах: 10 нМ будесонида, формотерола и тиотропия снижали экспрессию канала с 1,4 (1,3; 1,6) до 1,1 (1,0; 1,5) (p = 0,04), 1,0 (0,9; 1,4) (p = 0,04) и 1,0 (0,9; 1,3) (p = 0,03) соответственно.

Заключение

Заключение. Впервые установлено, что будесонид, формотерол и тиотропий могут снижать экспрессию катионных каналов TRPV1 и TRPV4 в мононуклеарах периферической крови in vitro. Полученные результаты расширяют представления о фармакологических эффектах препаратов базисной терапии БА и ХОБЛ и позволяют предположить существование дополнительного общего звена их фармакологического действия, связанного с регуляцией TRPV1/TRPV4 каналов.

Introduction

Introduction. Experimental evidence has demonstrated that the cation channels TRPV1 and TRPV4 are involved in the development of various pathological processes characteristic of asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) and, therefore, may be considered potential therapeutic targets for these diseases.

Aim

Aim. To analyze the effects of the maintenance therapy drugs used for asthma and COPD – budesonide, formoterol, and tiotropium – on the expression of TRPV1 and TRPV4 proteins in peripheral blood mononuclear cells in vitro.

Materials and methods

Materials and methods. Mononuclear cells for the experiment were isolated from the blood of 9 apparently healthy volunteers. The cells were incubated under control conditions or in medium containing budesonide, formoterol fumarate, or tiotropium bromide at concentrations of 1, 10, or 100 nM for 24 hours. After incubation, the cells were washed, and total TRPV1 and TRPV4 expression was analyzed by indirect flow cytometry. Expression values were presented as normalized median fluorescence intensity (nMFI).

Results

Results. Budesonide, formoterol, and tiotropium significantly reduced TRPV1 expression in lymphocytes and monocytes at all analyzed concentrations. For example, baseline TRPV1 expression in lymphocytes was 5.3 (4.9; 5.6), whereas exposure to 10 nM budesonide reduced it to 3.0 (2.6; 3.9) (p = 0.008), formoterol – to 2.8 (2.7; 3.6) (p = 0.01), and tiotropium – to 2.8 (2.4; 3.0) (p = 0.008). The corresponding values for monocytes were 4.9 (4.6; 6.8) (p = 0.02), 4.4 (4.1; 6.4) (p = 0.02), and 4.3 (3.6; 4.7) (p = 0.01), respectively, compared with baseline expression of 10.2 (8.0; 10.3). At the same time, the inhibitory effect of the drugs on TRPV4 expression was observed predominantly in lymphocytes: 10 nM budesonide, formoterol, and tiotropium reduced channel expression from 1.4 (1.3; 1.6) to 1.1 (1.0; 1.5) (p = 0.04), 1.0 (0.9; 1.4) (p = 0.04), and 1.0 (0.9; 1.3) (p = 0.03), respectively.

Conclusion

Conclusion. It was established for the first time that budesonide, formoterol, and tiotropium can reduce the expression of TRPV1 and TRPV4 cation channels in peripheral blood mononuclear cells in vitro. The obtained results expand current understanding of the pharmacological effects of asthma and COPD maintenance therapy and suggest the existence of an additional common component of their pharmacological action associated with the regulation of TRPV1/TRPV4 channels.

TRPV1TRPV4экспрессияингаляционная фармакотерапияХОБЛастмапроточная цитометриялимфоцитымоноцитыTRPV1TRPV4expressioninhalation pharmacotherapyCOPDasthmaflow cytometrylymphocytesmonocytesИсследование выполнено в рамках государственного задания (№ 125031904161-5)The study was carried out under the State Assignment (No. 125031904161-5)ReferencesSeluk L., Davis A.E., Rhoads S., Wechsler M.E. Novel asthma treatments: advancing beyond approved novel stepup therapies for asthma // Ann. Allergy Asthma Immunol. 2025. Vol.134, Iss.1. P.9–18. https://doi.org/10.1016/j.anai.2024.09.016Seluk L., Davis A.E., Rhoads S., Wechsler M.E. Novel asthma treatments: Advancing beyond approved novel stepup therapies for asthma. Ann. Allergy Asthma Immunol. 2025; 134(1):9–18. https://doi.org/10.1016/j.anai.2024.09.016Singh D., Menéndez Lobo A., Higham A., Alcázar Navarrete B. Biological therapy in COPD management: current evidence, challenges and opportunities // Arch. Bronconeumol. 2025. Vol.61, Iss.11. P.690–696. https://doi.org/10.1016/j.arbres.2025.07.017Singh D., Menéndez Lobo A., Higham A., Alcázar Navarrete B. Biological therapy in COPD management: current evidence, challenges and opportunities. Arch. Bronconeumol. 2025; 61(11):690–696. https://doi.org/10.1016/j.arbres.2025.07.017Müller I., Alt P., Rajan S., Schaller L., Geiger F., Dietrich A. Transient receptor potential (TRP) channels in airway toxicity and disease: an update // Cells. 2022. Vol.11, Iss.18. Article number:2907. https://doi.org/10.3390/cells11182907Müller I., Alt P., Rajan S., Schaller L., Geiger F., Dietrich A. Transient receptor potential (TRP) channels in airway toxicity and disease: an update. Cells 2022; 11(18):2907. https://doi.org/10.3390/cells11182907Наумов Д.Е., Сугайло И.Ю., Котова О.О., Гассан Д.А., Горчакова Я.Г., Мальцева Т.А. Сравнительная характеристика уровней экспрессии TRP каналов на макрофагах больных хронической обструктивной болезнью легких // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2022. Вып.85. С.37–46. https://doi.org/10.36604/1998-5029-2022-85-37-46Naumov D.E., Sugaylo I.Yu., Kotova O.O., Gassan D.A., Gorchakova Ya.G., Maltseva T.A. [Comparative characteristics of TRP channels expression levels on the macrophages of patients with chronic obstructive pulmonary disease]. Bûlleten' fiziologii i patologii dyhaniâ = Bulletin Physiology and Pathology of Respiration 2022; 85:37–46 (in Russian). https://doi.org/10.36604/1998-5029-2022-85-37-46Wang M., Zhang Y., Xu M., Zhang H., Chen Y., Chung K.F., Adcock I.M., Li F. Roles of TRPA1 and TRPV1 in cigarette smoke-induced airway epithelial cell injury model // Free Radic. Biol. Med. 2019. Vol.134. P.229–238. https://doi.org/10.1016/j.freeradbiomed.2019.01.004Wang M., Zhang Y., Xu M., Zhang H., Chen Y., Chung K.F., Adcock I.M., Li F. Roles of TRPA1 and TRPV1 in cigarette smoke-induced airway epithelial cell injury model. Free Radic. Biol. Med. 2019; 134:229–238. https://doi.org/10.1016/j.freeradbiomed.2019.01.004Mao W., Lan F., Liu Z., Yang T., Tan H., Yang Z. Effect of down-regulating TRPV1 on airway remodeling in COPD rats based on NF-κB/TGF-β1/Smads pathway analysis // Minerva Med. 2024. Vol.115. https://doi.org/10.23736/S0026-4806.24.09314-5Mao W., Lan F., Liu Z., Yang T., Tan H., Yang Z. Effect of down-regulating TRPV1 on airway remodeling in COPD rats based on NF-κB/TGF-β1/Smads pathway analysis. Minerva Med. 2024; 115. https://doi.org/10.23736/S0026-4806.24.09314-5Zhou L., Jian T., Wan Y., Huang R., Fang H., Wang Y., Liang C., Ding X., Chen J. Luteolin alleviates oxidative stress in chronic obstructive pulmonary disease induced by cigarette smoke via modulation of the TRPV1 and CYP2A13/NRF2 signaling pathways // Int. J. Mol. Sci. 2023. Vol.25, Iss.1. Article number:369. https://doi.org/10.3390/ijms25010369Zhou L., Jian T., Wan Y., Huang R., Fang H., Wang Y., Liang C., Ding X., Chen J. Luteolin alleviates oxidative stress in chronic obstructive pulmonary disease induced by cigarette smoke via modulation of the TRPV1 and CYP2A13/NRF2 signaling pathways. Int. J. Mol. Sci. 2023; 25(1):369. https://doi.org/10.3390/ijms25010369McGarvey L.P., Butler C.A., Stokesberry S., Polley L., McQuaid S., Abdullah H., Ashraf S., McGahon M.K., Curtis T.M., Arron J., Choy D., Warke T.J., Bradding P., Ennis M., Zholos A., Costello R.W., Heaney L.G. Increased expression of bronchial epithelial transient receptor potential vanilloid 1 channels in patients with severe asthma // J. Allergy Clin. Immunol. 2014. Vol.133, Iss.3. P.704–712.e4. https://doi.org/10.1016/j.jaci.2013.09.016McGarvey L.P., Butler C.A., Stokesberry S., Polley L., McQuaid S., Abdullah H., Ashraf S., McGahon M.K., Curtis T.M., Arron J., Choy D., Warke T.J., Bradding P., Ennis M., Zholos A., Costello R.W., Heaney L.G. Increased expression of bronchial epithelial transient receptor potential vanilloid 1 channels in patients with severe asthma. J. Allergy Clin. Immunol. 2014; 133(3):704–712.e4. https://doi.org/10.1016/j.jaci.2013.09.016Rehman R., Bhat Y.A., Panda L., Mabalirajan U. TRPV1 inhibition attenuates IL-13 mediated asthma features in mice by reducing airway epithelial injury // Int. Immunopharmacol. 2013. Vol.15, Iss.3. P.597–605. https://doi.org/10.1016/j.intimp.2013.02.010Rehman R., Bhat Y.A., Panda L., Mabalirajan U. TRPV1 inhibition attenuates IL-13 mediated asthma features in mice by reducing airway epithelial injury. Int. Immunopharmacol. 2013; 15(3):597–605. https://doi.org/10.1016/j.intimp.2013.02.010Rao Y., Gai X., Xiong J., Le Y., Sun Y. Transient receptor potential cation channel subfamily V member 4 mediates pyroptosis in chronic obstructive pulmonary disease // Front. Physiol. 2021. Vol.12. Article number:783891. https://doi.org/10.3389/fphys.2021.783891Rao Y., Gai X., Xiong J., Le Y., Sun Y. Transient receptor potential cation channel subfamily V member 4 mediates pyroptosis in chronic obstructive pulmonary disease. Front. Physiol. 2021; 12:783891. https://doi.org/10.3389/fphys.2021.783891Наумов Д.Е., Сугайло И.Ю., Гассан Д.А., Котова О.О., Горчакова Я.Г., Шелудько Е.Г. Особенности экспрессии TRP каналов и цитокиновый профиль мокроты у больных хронической обструктивной болезнью легких с прогрессирующей бронхиальной обструкцией // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2022. Вып.86. С.24–32. https://doi.org/10.36604/1998-5029-2022-86-24-32Naumov D.E., Sugaylo I.Yu., Gassan D.A., Kotova O.O., Gorchakova Ya.G., Sheludko E.G. [Peculiarities of TRP channels expression and cytokine profile of sputum in patients with chronic obstructive pulmonary disease and progressive bronchial obstruction]. Bûlleten' fiziologii i patologii dyhaniâ = Bulletin Physiology and Pathology of Respiration 2022; 86:24–32 (in Russian). https://doi.org/10.36604/1998-5029-2022-86-24-32Wiesner D.L., Merkhofer R.M., Ober C., Kujoth G.C., Niu M., Keller N.P., Gern J.E., Brockman-Schneider R.A., Evans M.D., Jackson D.J., Warner T., Jarjour N.N., Esnault S.J., Feldman M.B., Freeman M., Mou H., Vyas J.M., Klein B.S. Club cell TRPV4 serves as a damage sensor driving lung allergic inflammation // Cell Host Microbe. 2020. Vol.27, Iss.4. P.614–628.e6. https://doi.org/10.1016/j.chom.2020.02.006Wiesner D.L., Merkhofer R.M., Ober C., Kujoth G.C., Niu M., Keller N.P., Gern J.E., Brockman-Schneider R.A., Evans M.D., Jackson D.J., Warner T., Jarjour N.N., Esnault S.J., Feldman M.B., Freeman M., Mou H., Vyas J.M., Klein B.S. Club cell TRPV4 serves as a damage sensor driving lung allergic inflammation. Cell Host Microbe 2020; 27(4):614– 628.e6. https://doi.org/10.1016/j.chom.2020.02.006Al-Azzam N., Teegala L.R., Pokhrel S., Ghebreigziabher S., Chachkovskyy T., Thodeti S., Gavilanes I., Covington K., Thodeti C.K., Paruchuri S. Transient receptor potential vanilloid channel regulates fibroblast differentiation and airway remodeling by modulating redox signals through NADPH oxidase 4 // Sci. Rep. 2020. Vol.10, Iss.1. Article number:9827. https://doi.org/10.1038/s41598-020-66617-2Al-Azzam N., Teegala L.R., Pokhrel S., Ghebreigziabher S., Chachkovskyy T., Thodeti S., Gavilanes I., Covington K., Thodeti C.K., Paruchuri S. Transient receptor potential vanilloid channel regulates fibroblast differentiation and airway remodeling by modulating redox signals through NADPH oxidase 4. Sci. Rep. 2020; 10(1):9827. https://doi.org/10.1038/s41598-020-66617-2Bonvini S.J., Birrell M.A., Dubuis E., Adcock J.J., Wortley M.A., Flajolet P., Bradding P., Belvisi M.G. Novel airway smooth muscle-mast cell interactions and a role for the TRPV4-ATP axis in non-atopic asthma // Eur. Respir. J. 2020. Vol.56, Iss.1. Article number:1901458. https://doi.org/10.1183/13993003.01458-2019Bonvini S.J., Birrell M.A., Dubuis E., Adcock J.J., Wortley M.A., Flajolet P., Bradding P., Belvisi M.G. Novel airway smooth muscle-mast cell interactions and a role for the TRPV4-ATP axis in non-atopic asthma. Eur. Respir. J. 2020; 56(1):1901458. https://doi.org/10.1183/13993003.01458-2019Wang H., Zhou M., Cong B., He P., Xu M., Ni X., Ma B. Transient changes in P2X3 but not TRPV1 mRNA expression in rat after prenatal exposure to glucocorticoids // Auton. Neurosci. 2008. Vol.141, Iss.1-2. P.112–116. https://doi.org/10.1016/j.autneu.2008.03.010Wang H., Zhou M., Cong B., He P., Xu M., Ni X., Ma B. Transient changes in P2X3 but not TRPV1 mRNA expression in rat after prenatal exposure to glucocorticoids. Auton. Neurosci. 2008; 141(1–2):112–116. https://doi.org/10.1016/j.autneu.2008.03.010Ahn S., Park J., An I., Jung S.J., Hwang J. Transient receptor potential cation channel V1 (TRPV1) is degraded by starvation- and glucocorticoid-mediated autophagy // Mol. Cells. 2014. Vol.37, Iss.3. P.257–263. https://doi.org/10.14348/molcells.2014.2384Ahn S., Park J., An I., Jung S.J., Hwang J. Transient receptor potential cation channel V1 (TRPV1) is degraded by starvation- and glucocorticoid-mediated autophagy. Mol. Cells 2014; 37(3):257–263. https://doi.org/10.14348/molcells.2014.2384Hong S., Zheng G., Wu X., Snider N.T., Owyang C., Wiley J.W. Corticosterone mediates reciprocal changes in CB1 and TRPV1 receptors in primary sensory neurons in the chronically stressed rat // Gastroenterology. 2011. Vol.140, Iss.2. P.627–637.e4. https://doi.org/10.1053/j.gastro.2010.11.003Hong S., Zheng G., Wu X., Snider N.T., Owyang C., Wiley J.W. Corticosterone mediates reciprocal changes in CB1 and TRPV1 receptors in primary sensory neurons in the chronically stressed rat. Gastroenterology 2011; 140(2):627– 637.e4. https://doi.org/10.1053/j.gastro.2010.11.003Lee B., Ahn C., Jeon B.H., Jung E.M., Yoo Y.M., Jeung E.B. Regulatory effect of dexamethasone on tracheal calcium processing proteins and mucosal secretion // J. Physiol. Pharmacol. 2019. Vol.70, Iss.1. https://doi.org/10.26402/jpp.2019.1.12Lee B., Ahn C., Jeon B.H., Jung E.M., Yoo Y.M., Jeung E.B. Regulatory effect of dexamethasone on tracheal calcium processing proteins and mucosal secretion. J. Physiol. Pharmacol. 2019; 70(1). https://doi.org/10.26402/jpp.2019.1.12Zhu L., Zhao L., Qu R., Zhu H.Y., Wang Y., Jiang X., Xu G.Y. Adrenergic stimulation sensitizes TRPV1 through upregulation of cystathionine β-synthetase in a rat model of visceral hypersensitivity // Sci. Rep. 2015. Vol.5. Article number:16109. https://doi.org/10.1038/srep16109Zhu L., Zhao L., Qu R., Zhu H.Y., Wang Y., Jiang X., Xu G.Y. Adrenergic stimulation sensitizes TRPV1 through upregulation of cystathionine β-synthetase in a rat model of visceral hypersensitivity. Sci. Rep. 2015; 5:16109. https://doi.org/10.1038/srep16109Hirsh A.J. Altering airway surface liquid volume: inhalation therapy with amiloride and hyperosmotic agents // Adv. Drug Deliv. Rev. 2002. Vol.54, Iss.11. P.1445–1462. https://doi.org/10.1016/S0169-409X(02)00161-8Hirsh A.J. Altering airway surface liquid volume: inhalation therapy with amiloride and hyperosmotic agents. Adv. Drug Deliv. Rev. 2002; 54(11):1445–1462. https://doi.org/10.1016/S0169-409X(02)00161-8Farkas Á., Jókay Á., Balásházy I., Füri P., Müller V., Tomisa G., Horváth A. Numerical simulation of emitted particle characteristics and airway deposition distribution of Symbicort® Turbuhaler® dry powder fixed combination aerosol drug // Eur. J. Pharm. Sci. 2016. Vol.93. P.371–379. https://doi.org/10.1016/j.ejps.2016.08.036Farkas Á., Jókay Á., Balásházy I., Füri P., Müller V., Tomisa G., Horváth A. Numerical simulation of emitted particle characteristics and airway deposition distribution of Symbicort® Turbuhaler® dry powder fixed combination aerosol drug. Eur. J. Pharm. Sci. 2016; 93:371–379. https://doi.org/10.1016/j.ejps.2016.08.036Brand P., Meyer T., Weuthen T., Timmer W., Berkel E., Wallenstein G., Scheuch G. Lung deposition of radiolabeled tiotropium in healthy subjects and patients with chronic obstructive pulmonary disease // J. Clin. Pharmacol. 2007. Vol.47, Iss.10. P.1335–1341. https://doi.org/10.1177/0091270006295788Brand P., Meyer T., Weuthen T., Timmer W., Berkel E., Wallenstein G., Scheuch G. Lung deposition of radiolabeled tiotropium in healthy subjects and patients with chronic obstructive pulmonary disease. J. Clin. Pharmacol. 2007; 47(10):1335–1341. https://doi.org/10.1177/0091270006295788

The authors declare that there are no conflicts of interest present.